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超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù):4186 更新時(shí)間:2020-02-26

超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)試劑盒說明書

可見分光光度法

測定意義:

 

SODEC 1.15.1.1廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中催化超氧化物陰離子 發(fā)生岐化作用,生成 H2O2 和 O2SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2 主要生成 酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

 

測定原理:

 

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-.從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液藍(lán)色越深, 說明 SOD 活性愈低,反之活性越高。

 

需自備的儀器和用品:

 

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

 

試劑的組成和配制:

 

提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:15mL×1 瓶,4℃保存;

 

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存,用時(shí)加入27ml蒸餾水,充分搖勻懸濁液;

試劑三液體 175μL×1 支,4℃保存;(與蒸餾水1:1稀釋再使用)

 

試劑四液體 10mL×1 瓶4℃保存。

 

粗酶液提?。?/span>

 

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

 

測定步驟

 

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 560nm蒸餾水調(diào)零。

 

2、測定前將試劑一、二和四 37哺乳動(dòng)物25其他物種水浴 5min 以上。

3、樣本測定EP 管中依次加入下列試劑):

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

試劑名稱μL

測定管

對(duì)照管

 

 

 

試劑一

240

240

 

 

 

試劑二

510

510

 

 

 

試劑三

6

6

 

 

 

樣本

90

 

 

 

 

試劑四

180

180

 

 

 

蒸餾水

 

90

 

 

 

 

充分混勻,室溫靜置 30min 后,加入 1mL 玻璃比色皿560nm 處測定各管吸光值 A。

注意事項(xiàng):

 

1、試劑三為酶,不可冷凍使用時(shí)在冰上放置。

 

2、對(duì)照管只需要做一管。

 

SOD 活性計(jì)算:

 

1、抑制百分率的計(jì)算

 

抑制百分率(A 對(duì)照管A 測定管) ÷A 對(duì)照管× 100%

 

盡量使樣本的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi)。如果計(jì)算出來的抑制百分率小于 30%或大于 70%則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需將樣本用 提取液適當(dāng)稀釋;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測樣本。 2、SOD 酶活性單位在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50%時(shí),反應(yīng)體系 中的 SOD 酶活力定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL)

 

3、SOD 酶活性計(jì)算

 

(1)血清(漿)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1抑制百分率)×V 反總]÷V ×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1抑制百分率樣本稀釋倍數(shù)

 

(2)組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計(jì)算:

a.按樣本蛋白濃度計(jì)算

 

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1抑制百分率)×V 反總]÷(V ×Cpr)×樣本稀釋倍數(shù)

 

=11.4×抑制百分率÷(1抑制百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數(shù) 需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

b.按樣本鮮重計(jì)算

 

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1抑制百分率)×V 反總]÷(W×V ÷V 樣總樣本稀釋 倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1抑制百分率)÷W×樣本稀釋倍數(shù)

 

c.按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算

 

SOD 活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V ÷V 樣總樣本稀釋 倍數(shù)=0.0228×抑制百分率÷(1抑制百分率樣本稀釋倍數(shù)

 

V 反總反應(yīng)體系總體積,1.026mL;V 加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.09mLV 樣總 加入提取液體積,1 mL;Cpr樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL ;W樣本質(zhì)量,g;500細(xì)胞或 細(xì)菌總數(shù)500 萬

糖原含量試劑盒說明書

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