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羥自由基清除能力測定試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類
保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。
測定原理
H2O2/ Fe2+通過Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化為Fe3+，導(dǎo)致 536nm吸光度下降，樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力。
自備實(shí)驗(yàn)用品
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體 50 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存。
樣品的制備
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，
加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2. 血清、果汁等液體樣品可直接測定。
3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度，如 5 mg/mL。
操作步驟
| 空白管 | 對照管 | 測定管 |
試劑一（µL） | 150 | 150 | 150 |
試劑二（µL） | 400 | 400 | 400 |
試劑三（µL） | 100 | 100 | 100 |
立即混勻，防止局部顏色過濃 | |||
樣品（µL） |
|
| 250 |
試劑四（µL） |
| 100 | 100 |
H2O（µL） | 350 | 250 |
|
混勻、37℃，60min，雙蒸水調(diào)零，測定 OD 536 | |||
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
計(jì)算公式
羥自由基清除率 D% =（OD測定管- OD對照管）÷（OD空白管-OD對照管）×100%
注意事項(xiàng)
為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品，血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。
