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犬狂犬病毒抗體檢測試劑盒操作步驟及結(jié)果判定
點擊次數(shù):4426 更新時間:2022-02-28

 

犬狂犬病毒抗體檢測試劑盒

使用說明書

介紹】

狂犬病毒(Rabies virus, RBV)抗體檢測試劑盒用于檢測貓、犬等動物血清中的狂犬病毒抗體,用于評估狂犬病毒疫苗免疫狀況。

本試劑盒采用阻斷ELISA法,在酶標板條微孔上預包被狂犬病毒抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有狂犬病毒特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標的抗狂犬病毒單抗,樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合;經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

【組份】

1

抗原預包被板條

1/2塊

7

終止液

11ml

2

酶結(jié)合物

11/22ml

8

陰性對照

1/2ml

3

10倍濃縮洗滌液

100ml

9

陽性對照

0.5/1ml

4

樣本稀釋液

50ml

10

封板膜

2/4張

5

顯色液

11/22ml

     

6

說明書

1份

     

【需自備的設(shè)備及試劑】

1. 微量移液器:10µl-100µl、100µl-1000µl。

2. 一次性移液器吸頭。

3. 量筒:500ml。

4. 96孔板酶標儀。

5. 蒸餾水或去離子水。

6. 洗瓶或洗板機。

【樣品制備】

取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

【洗滌液的準備】

濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

【注意事項】

1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。

2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。

3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

4. TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5. 檢測板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。

6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8. 抗原包被板為一次性用品,不得重復使用; 

【操作步驟】

1. 每次試驗均設(shè)置空白孔1孔、陽性對照1孔、陰性對照2孔,陰性對照、陽性對照直接取100ul/孔加入孔內(nèi);

2. 將樣品稀釋液按90ul/孔加入到微孔反應板內(nèi),之后將待檢樣品血清按10ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻(移液器槍頭請勿混用);

3. 蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育60分鐘。

4. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重復4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干。

5. 除空白對照孔外,每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

6. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6次, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

7. 每孔加顯色液100µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。

8. 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

以空白對照調(diào)零用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度A值。

試驗成立的條件是

N值>0.5、同時陽性對照(P)阻斷率>50%;

計算方法:

PI (阻斷率)=  1 —(樣品OD值 / 陰性O(shè)D均值)

陰陽性判斷:

PI(阻斷率)>40%則判斷為陽性;

PI40%則判斷為陰性。

注:(PI=40%相當于抗體滴定度0.5IU/ml)

【有效期】

貯存方法 2 - 8ºC下貯存。

有效期 12個月。

 

 

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