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兔臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):819 更新時(shí)間:2015-11-01


兔臟器組織淋巴細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:


名稱產(chǎn)品規(guī)格編號(hào)
A兔臟器組織淋巴細(xì)胞分離液
200ml
B樣本稀釋液(贈(zèng)品)2010C1119200ml
C清洗液(贈(zèng)品)2010X1118200ml
DF液(贈(zèng)品)F2013TBD200ml
E說(shuō)明書(shū)
1份



【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A.適用儀器
zui大離心力可達(dá) 1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B.耗材

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)產(chǎn)地
15ml離心管散裝339650美國(guó)  NUNC
15ml離心管架裝339651美國(guó)  NUNC
50ml離心管散裝339652美國(guó)  NUNC
50ml離心管架裝339653美國(guó)  NUNC
無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

【檢驗(yàn)方法】

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

1.首先制備組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見(jiàn)“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)"。

2.取一支15ml離心管,加入與組織單細(xì)胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得少于

3ml)。

3.用吸管小心吸取組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min。(注:

根據(jù)組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件,組織單細(xì)胞懸液量越大,離心力越大,離心時(shí)間

越長(zhǎng),具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果)。

4.離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋

巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

5.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一15ml離心管中,向離心管中加入

10ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),混勻細(xì)胞。

6.250g,離心 10min。

7.棄上清。

8.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞。

9.250g,離心 10min。

10.重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

【注意事項(xiàng)】

1.全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui

好在取樣 2h內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時(shí)間越長(zhǎng),細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過(guò)6h

分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

2.本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離

心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面

會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。

3.吸取過(guò)多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒

細(xì)胞數(shù)量增加。

4.分離液用量大于組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí),分離效果更佳。

5.如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)上海研謹(jǐn)生物以尋求幫助。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存,有效期 2年。本品易感染細(xì)菌,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,啟

封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。

【參考值(參考范圍)】

本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度大于 80%

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1.組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。

2.所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

3.所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

4.所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法

A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR技術(shù)

注:上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸上海研謹(jǐn)生物科技公司搜索細(xì)胞分離、

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè)",并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況                             出現(xiàn)原因                 建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層    轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短     適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中            轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)      適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后白環(huán)層彌散                        細(xì)胞密度過(guò)大                調(diào)整細(xì)胞密度
離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)                細(xì)胞密度過(guò)小                調(diào)整細(xì)胞密度

2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地

區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),恒定離

心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min為準(zhǔn)。



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