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脲酶(UE)活性檢測試劑盒說明書

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詳細(xì)介紹

脲酶(UE)活性檢測試劑盒說明書

 

注意:正式測定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

 規(guī)格100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存,臨用前加3mL蒸餾水充分溶解; 試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存;

試劑三 A 液:液體 0.4mL×1 支,4℃保存;

試劑三 B 液:液體 1.6mL×1 瓶,4℃保存;臨用前將 A 液倒入 B 液中混合,待用; 試劑四:液體 2mL×1 瓶,4℃保存;

標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,4℃保存。1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明:

 

 

 

微量法

 

脲酶UE廣泛分布于植物的種子中,也存在于動(dòng)物的血液和尿液中,某些微生物也能分泌脲酶。UE能夠水解尿素產(chǎn)生氨和碳酸,對尿素轉(zhuǎn)化起關(guān)鍵作用。利用靛酚藍(lán)比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N來反應(yīng)UE活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

操作步驟: 一、樣品處理

1. 組織:按照質(zhì)量g):提取液體積(mL)15-10  的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液,冰上勻漿后于4℃,12000g 離心15min,取上清待測。

  • 細(xì)胞/細(xì)菌:按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量104個(gè):提取液體積mL)為500-10001 的比例(建議500 萬個(gè)細(xì)胞加入1mL 提取液),冰浴超聲波破碎(功率300w,超聲3 s,間隔7 s,總時(shí)間3min); 然后4℃,12000g 離心15min,取上清置于冰上待測。

3. 血清(漿)或其它液體:直接檢測。二、測定操作:

1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,波長調(diào)至 630nm,可見分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

2、將 1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。

3、加樣表:

試劑名稱(µL

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測定管

對照管

樣品

 

 

20

20

蒸餾水

-

 

 

40

 

第 1頁,共 2

 

試劑一

-

-

40

-

試劑二

-

-

80

80

充分混勻,于 37℃反應(yīng) 1h,于 EP 管中或者 96 孔板中加入下列溶液

反應(yīng)混合液

-

-

80

80

蒸餾水

80

-

 

 

標(biāo)準(zhǔn)液

-

80

 

 

試劑三

16

16

16

16

試劑四

12

12

12

12

混勻,室溫靜止 20min。

蒸餾水

92

92

92

92

充分混勻后測定 630nm 處吸光值,記為 A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定管和 A 對照管。計(jì)算?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,?A 測定=A 測定管-A 對照管。

三、計(jì)算公式:

1、液體中UE活力的計(jì)算:

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘產(chǎn)生1µg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UEU/mL=?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷V÷T

=0.233×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)。

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中UE活力的計(jì)算:

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1µg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE活力(U/mg prot=?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(V×Cpr)÷T

=0.233×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1µg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE活力(U/g鮮重)=?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(W× V÷V提取)÷T

=0.233×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W。

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1百萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1µg NH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。

UE活力(U /106 cell=?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)品×V酶促÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V提取) ÷T

=0.233×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量。

C標(biāo)準(zhǔn)液:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,2µg/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60minV酶促:酶促反應(yīng)體系總體積,0.14mL

V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V提?。禾崛∫后w積,1mLCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;

W:樣本質(zhì)量,g;細(xì)胞數(shù)量:以百萬計(jì)。注意事項(xiàng):

1. ?A測定大于0.6時(shí),建議將反應(yīng)混合液用蒸餾水稀釋或者樣品用蒸餾水稀釋后在進(jìn)行測定。

人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUV-EC)培養(yǎng)說明書

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