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羥自由基清除能力測定試劑盒說明書

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詳細(xì)介紹

羥自由基清除能力測定試劑盒說明書

可見分光光度法

注意:正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子,造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損,進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一,在抗氧化類

保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測定原理

H2O2/ Fe2+通過Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化為Fe3+,導(dǎo)致 536nm吸光度下降,樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了樣品清除羥自由基的能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液:液體 50 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 8 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 20 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 5 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 5 mL×1 瓶,4℃保存。

樣品的制備

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2. 血清、果汁等液體樣品可直接測定。

3. 提取物(或者藥物)可配制成一定濃度,如 5 mg/mL。

操作步驟

 

空白管

對照管

測定管

試劑一(µL)

150

150

150

試劑二(µL)

400

400

400

試劑三(µL)

100

100

100

立即混勻,防止局部顏色過濃

樣品(µL)

 

 

250

試劑四(µL)

 

100

100

H2O(µL)

350

250

 

混勻、37℃,60min,雙蒸水調(diào)零,測定 OD 536

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

計(jì)算公式

羥自由基清除率 D% =(OD測定管- OD對照管)÷OD空白管-OD對照管×100%

 

 

注意事項(xiàng)

為了比較不同樣品羥自由基清除能力,對于同一批樣品必須加入等量的樣品,血清、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積,提取物(或者藥物)配制成同樣濃度。

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