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BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

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詳細(xì)介紹

BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 

微量法

注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內(nèi)。

貨號(hào)YX-W-C202

規(guī)格100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容

試劑A:液體×1瓶,4℃保存。 

試劑B:液體×1支,4℃保存。 

標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支,4℃保存。 

產(chǎn)品說(shuō)明

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。 測(cè)定原理: 堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCACu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰ZUI強(qiáng)。 自備儀器和用品: 

臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。 

工作液配制:臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.2mL),將試劑AB按照501的比例混合,蓋緊后充分混勻。 

操作步驟:

一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span> 

1. 液體樣品:澄清液體樣品可以直接測(cè)定。 

2. 組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水),冰浴勻漿,10000rpm,4℃離心10min,取上清,即待測(cè)液。(動(dòng)物樣品常常需要稀釋) 

3. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000rpm,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。 

 

二、測(cè)定操作: 

1. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到562 nm,蒸餾水調(diào)零。

  • 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30 min。

 

 空白管 

標(biāo)準(zhǔn)管 

測(cè)定管 

蒸餾水(μL 

4

 

 

標(biāo)準(zhǔn)品(μL 

 

4

 

待測(cè)液(μL 

 

 

4

工作液(μL 

200

200

200

混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測(cè)定吸光值A(chǔ),分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測(cè)定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。 

三、計(jì)算公式: 

Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×A測(cè)定管-A空白管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) 

=0.5×A測(cè)定管-A空白管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

注意事項(xiàng):

  • BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒,適用于測(cè)定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測(cè)定前取1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),樣品蛋白含量太高的話,請(qǐng)稀釋至相應(yīng)濃度范圍內(nèi),以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。 
  • 待測(cè)樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。 
  • 由于受測(cè)定溫度及時(shí)間等的影響,請(qǐng)嚴(yán)格按照給定條件測(cè)定。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用!請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途!

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