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過氧化物酶(Peroxidase,POD)試劑盒說明書

提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大?。?/td>
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詳細(xì)介紹

過氧化物酶(Peroxidase,POD)試劑盒說明書

可見分光光度法

試劑的組成:

提取液:液體60mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體60mL×1瓶,4保存;

試劑二:液體×2瓶,4保存;用時(shí)每瓶加入5mL試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

試劑三:液體10 mL×1瓶,4保存。

測(cè)定意義:

PODEC 1.11.1.7廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟:

  • 粗酶液提?。?/span>
  • 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

  • 血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
  • 測(cè)定步驟和加樣表:

試劑名稱(µL

測(cè)定孔

樣本

15

蒸餾水

270

試劑一

520

試劑二

130

試劑三

135

測(cè)定前將試劑一、二和三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)放置10min。在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄470nm30s時(shí)的吸光值A11min30s后的吸光值A2。計(jì)算ΔAA2-A1。

 

注意:

  • 若一次性測(cè)定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)放置10min以上,測(cè)定時(shí)加入15µL樣本和1055µL混合液測(cè)定。
  • 如果ΔA小于0.005,可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到5min。如果ΔA大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

三、POD活性計(jì)算:

  • 血清(漿)POD活性

單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

計(jì)算公式:PODU/mL=ΔA×V反總÷V÷0.01÷T =7133×ΔA

  • 組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性
  • 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

PODU/mg prot)=ΔA×V反總÷V×Cpr÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

  • 按樣本鮮重計(jì)算

單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

PODU/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

  • 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

PODU/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,1.07mL; V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。

 

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

 

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

細(xì)胞增殖

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA 測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

Taqman探針

ATP/ADP檢測(cè)

 

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

滬公網(wǎng)安備 31011802001678號(hào)

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