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同位素標記定量:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags)分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標記定量技術(shù)，利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側(cè)鏈基團，不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現(xiàn)不同樣品間蛋白質(zhì)組的比較。

iTRAQ實驗步驟:

1.樣品準備:將待測樣品進行定量計算出樣品蛋白濃度;

2.蛋白還原烷基化及酶解:每組樣品各取100μg按照iTRAQ試劑盒要求進行處理，使用測序級胰蛋白酶溶液酶解后,超濾管離心收集酶解肽段;

3. iTRAQ標記:將ITRAQ試劑平衡到室溫,用150μL異丙醇溶解，取酶解肽段加入iTRAQ試劑后室溫反應2 h,加入水終止反應，等量混合不同組樣品，真空冷凍干燥樣品: .

4. LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrap進行串聯(lián)質(zhì)譜鑒定。

5.數(shù)據(jù)處理及生信分析

結(jié)果展示：

全局分析聚類熱圖

*0的蛋白數(shù)目統(tǒng)計分析

實驗周期及交付標準

1.實驗周期: 4-6周

2.交付標準:蛋白定量結(jié)果、鑒定結(jié)果、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、生信分析結(jié)果(G0分析. KEGG分析等等)

需確認的信息

1.樣本的種屬

2.樣本的類型(組織or細胞or血液)

3.樣本的數(shù)量及分組

4.分析要求

參考文獻

[1]XuX，Zhu Q，Zhang R，et al. ITRAQ-Based Proteomics Analysis of Acute Lung Injury Induced by Oleic Acid in

Mice[J]. Cellular Physiology and Biochemistry, 2017:1949-1964.

[2]QuZ, GaoF , LiL, et al. Label-Free Quatitative Proteomic Analysis of Diferentially Expressed Membrane Proteins

of Pulmonary Alveolar Macrophages Infected with Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome

Virus and Its Attenuated Strain[J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.

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