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免疫組化試劑盒使用說明書
免疫組化試劑盒使用說明書
更新時間:2025-01-14
型    號:
所屬分類:常用試劑
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免疫組化試劑盒保存方法:2-8℃保存。 有效期:一年。 生產(chǎn)日期:見封口。

免疫組化試劑盒使用說明書產(chǎn)品概述:

免疫組化試劑盒使用說明書

 

工作原理:

辣根過氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不會遮蓋抗原的結(jié)合部位,具有較高活性及特異性,可溶性佳,生成的產(chǎn)物不擴散,可作用于多種底物,產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強,易進入細胞內(nèi)。DAB H2O2存在的情況下,可以作為HRP的電子供體,產(chǎn)生褐色的不溶顆粒,可作為顯色的試劑。

試劑盒內(nèi)容:

 

名稱

規(guī)格

1

0.01mol/L pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液

1L

2

PBS緩沖液

2L

3

廣譜二抗

3mL

4

30%H2O 2

10 mL

5

DAB顯色液I

0.6mL

6

DAB顯色液II

0.6mL

 

自備試劑:無水乙醇、蘇木素。

操作步驟

1. 60℃常規(guī)脫蠟至水將石蠟切片先后浸入二甲,二甲10min。然后逐級降濃度酒精入水,每次3-5 min

無水

35min

90% 酒精

35min

85% 酒精

35min

75% 酒精

35min

PBS洗滌3

每次5 min

2.熱修復(fù)抗原: 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10 min后,反復(fù)1-2 次,置于室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH6.0PBS洗滌3次,每次5 min

3.消除內(nèi)源性過氧化物酶:3% H 2 O 2 室溫孵育 5-10 min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5 min

4.滴加一抗: 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上,37孵育1小時左右或者4過夜, pH7.4PBS洗滌3次,每次5 min 。(一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關(guān)系。一般來說,陽性染色強度不夠時,可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間;背景過高時,可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。)

5.加入廣譜二抗,37℃孵育1小時,取出后PBS洗滌3次,每次5 min。

6.DAB顯色: DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片,室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時間。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)。

7..觀察顯色后自來水沖,蘇木精復(fù)染1-2min,,自來水沖10min,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,干燥,分析拍照

 

 

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